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invitrogen R250-01 Zeocin博莱霉素 博来霉素 125mg/1.25ml

Zeocin是一种属于争光霉素家族的糖蛋白抗生素, 在体内能作用于大多数细菌(包括E. coli)、真菌(如:酵母菌)、植物细、动物细胞。(此产品只用于科研实验,非医用)

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产品关键词:

Zeocin 博莱霉素(博来霉素);Phleomycin 腐草霉素;Sh ble基因;Streptomyces verticillus 轮枝链霉菌;Hygromycin B 潮霉素B;G418遗传霉素;CAS NO.:11006-33-0


基本描述:

Zeocin™是博来霉素/腐草霉素(bleomycin/phleomycin)抗生素家族的成员之一,从轮枝链霉菌Streptomyces verticillus中分离得到,对细菌、真菌(包括酵母菌)、植物和哺乳动物细胞具很强的毒性。来自Streptoalloteichus hindustanus的Sh ble基因赋予Zeocin抗性。


Zeocin™是腐草霉素D1的商业名称,一种碱性、水溶性、铜离子螯合的糖肽抗生素。铜离子的存在使得溶液为蓝色,此铜螯合的形式为无活性。一旦进入细胞后,二价铜离子(Cu2+)被还原为一价铜离子(Cu+),并被细胞内的巯基化合物去除。铜离子被去除后,Zeocin™被活化,嵌入DNA使其断裂,最终导致细胞死亡。


抗性基因:

Zeocin™抗性由编码一种13,665Da大小蛋白的Sh ble基因(Streptoalloteichus hindustanus bleomycin gene)赋予,该蛋白化学计量方式结合Zeocin™,抑制其DNA双链切割活性。因此,能表达此蛋白的真核和原核宿主细胞被赋予Zeocin™抗性。


基本特性:

1)CAS NO.:11006-33-0

2)化学式:C55H83N19O21S2Cu

3)分子量:1137.41 g/mol

4)外观:蓝色溶液(100mg/ml in deionized,autoclaved water)

5)运输:冰袋运输

6)保存:-30°C~-10°C,至少1年有效

7)大肠杆菌筛选:25-50μg/mL(低盐LB培养基,NaCl浓度不能超过5g/L)

8)酵母菌筛选:50-300μg/mL(YPD或基本培养基)

9)哺乳动物细胞筛选:50-1000μg/mL(合适培养基,根据细胞系而不同)


注意事项:

1)Zeocin™对光敏感,需将抗生素,或含该抗生素的平板或培养基置于黑暗处。

2)降低细菌培养基的盐浓度,调整pH到7.5使其保持活性,因高离子强度和酸或碱性都会抑制Zeocin™活性;

3)储存Zeocin™在-30°C~-10°C,使用前需冰上融化。

4)Zeocin™有毒,为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


使用方法(应用举例):

1)大肠杆菌(E. Coli.)

宿主:不能包含Tn5转座子(比如:Top10,DH5,DH10)

培养基:使用低盐LB(10g Trypton,5g NaCl,5g Yeast extract),pH 7.5,防止Zeocin™失活

选择浓度:25-50μg/mL用于大肠杆菌筛选


2)酵母菌(Yeast)

宿主:酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae),毕赤酵母(Pichia pastoris)

培养基:含1M山梨醇的YPD(电转化细胞);YPD或基本培养基(化学转化细胞);测试培养基调pH到6.5-8.0,选择pH值允许使用最低浓度Zeocin™。

转化方法:电转法,使用锂离子步骤或使用EasyComp试剂盒。不能使用原生质体用于酵母转化,因Zeocin™会引起完整细胞死亡。

选择浓度:50-300μg/mL,取决于酵母菌类型、培养基pH和离子强度。建立杀灭曲线确定能杀死未转化宿主细胞的最低Zeocin™浓度。


3)哺乳动物细胞(Mammalian cells)

50-1000μg/mL用于筛选稳定转染细胞系(平均常用浓度为250-400μg/mL)。取决于细胞系,需要2-6周用Zeocin™筛选得到稳转集落(foci)。进行稳转株正式筛选前,需确定能够杀死所有未转染宿主细胞的最低Zeocin™浓度。

1) 确定细胞对Zeocin™的敏感性

2)筛选稳定转染细胞系

筛选小技巧:若是细胞对Zeocin™耐性更强,可用含Zeocin™培养基进行细胞分盘,并置于37°C孵育2-3h,使得细胞贴壁。然后将细胞置于4°C,2h。记得使用Hepes作为培养基的缓冲体系。重新将细胞置于37°C孵育。4°C孵育细胞的目的是短时间内终止细胞分化,使得Zeocin™能发挥作用,杀死细胞。




应用图片【Zeocin™筛选下的HEK293细胞】:

HEK293细胞用含10% FBS,1mM L-谷氨酰胺和400μg/mL双抗的培养基,分别在添加和未添加400μg/mLZeocin™的培养基选择培养。

 

图1,未经Zeocin™筛选的HEK293细胞。


 

图2,经Zeocin™筛选3天后的HEK293细胞。随着质膜破裂,往细胞外延伸长出长臂(long appendages)。(见实心箭头标注)


 

图3,经Zeocin™筛选3天后的HEK293细胞。细胞开始破裂,培养基内发现细胞颗粒。(见空心箭头标注)

  • invitrogen R250-01 Zeocin博莱霉素 博来霉素 125mg/1.25ml
    • 产品名称:invitrogen R250-01 Zeocin博莱霉素 博来霉素 125mg/1.25ml
    • 产品品牌:invitrogen R250-01 Zeocin博莱霉素 博来霉素 125mg/1.25ml
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